高致病性禽腺病毒血清4型Hexon蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备 |
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作者姓名: | 王雪平 张孝俊 李晓月 王国栋 张福良 宋玉伟 张明亮 马磊 |
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作者单位: | 安阳工学院河南省兽用生物制品研究与应用国际联合实验室 |
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基金项目: | 国家自然科学基金资助项目(NSFC32002313);;河南省高等学校重点科研项目(20B230001); |
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摘 要: | 【目的】原核表达禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)Hexon蛋白,并制备兔抗Hexon多克隆抗体,为FAdV-4 Hexon功能研究提供材料。【方法】采用基于PCR的长DNA序列准确合成(PCR-based accurate synthesis, PSA)方法,设计全长拼接引物,在引物两端各设计保护性碱基合成FAdV-4 Hexon基因;利用同源重组技术将其连接至pCzn1-Hexon表达载体,获得pCzn1-Hexon重组质粒进行原核表达,采用纯化重组蛋白免疫新西兰白兔制备兔抗Hexon蛋白的多克隆抗体。以间接ELISA方法测定多克隆抗体效价;通过Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定多克隆抗体的特异性。【结果】重组原核表达质粒pCzn1-Hexon经双酶切及测序鉴定证明构建正确;获得的重组蛋白以包涵体的形式表达,分子质量约为41 ku;用纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔后,通过间接ELISA方法检测抗体效价高达1∶512 000。以制备的多克隆抗体为一抗,通过Western blotting和IFA检测到鸡肝...
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关 键 词: | 禽腺病毒4型 Hexon蛋白 原核表达 多克隆抗体 |
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