| Kozak序列引导的表达兔出血症病毒2型VP60蛋白重组腺病毒的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 肖璐,于吉锋,罗燕,谢晶,叶勇刚,吴学婧,毛从剑,李兴玉,曹冶,林毅,潘梦,叶健强,魏勇,康润敏.Kozak序列引导的表达兔出血症病毒2型VP60蛋白重组腺病毒的构建及鉴定[J].中国畜牧兽医,2023(8):3336-3344. |
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| 作者姓名： | 肖璐 于吉锋 罗燕 谢晶 叶勇刚 吴学婧 毛从剑 李兴玉 曹冶 林毅 潘梦 叶健强 魏勇 康润敏 |
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| 作者单位： | 1. 四川省畜牧科学研究院动物遗传育种四川省重点实验室;2. 四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室 |
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| 基金项目： | 四川省自然科学基金项目(2022NSFSC0081)； |
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| 摘 要： | 【目的】试验旨在以复制缺陷型人5型腺病毒(Ad5)为载体，构建Kozak序列引导的表达兔出血症病毒2型(RHDV2)VP60蛋白的重组腺病毒，为RHDV2新型疫苗研究提供依据。【方法】修饰、合成带有Kozak序列的VP60基因序列，将其与腺病毒穿梭质粒进行重组，转化大肠杆菌TOP10感受态细胞，构建重组腺病毒穿梭质粒，并利用酶切与测序对重组腺病毒穿梭质粒进行鉴定；采用Ad Max腺病毒包装系统，基于HEK293细胞进行穿梭质粒与腺病毒骨架质粒的定点同源重组，构建重组腺病毒Ad5-RHDV2-VP60并感染HEK293细胞，通过RT-PCR、Western blotting及间接免疫荧光试验(IFA)对重组腺病毒进行表达验证；利用Reed-Muench方法测定重组腺病毒的病毒滴度。【结果】重组腺病毒穿梭质粒酶切鉴定结果可见2条大小分别为3 895和1 752 bp的条带，测序比对结果显示，其与GenBank中公布的相应序列相似性>99%,表明穿梭质粒构建成功。RT-PCR结果可见大小约为515 bp的特异性条带；Western blotting结果显示，大小约为60 ku的VP60...
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| 关 键 词： | 兔瘟 兔出血症病毒2型(RHDV2) 重组腺病毒 HEK293细胞 Kozak序列 |
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