多浪羊NPTX1基因克隆、生物信息学分析及在初情期的表达研究

【目的】试验旨在克隆多浪羊神经元正五聚体蛋白1(neuronal pentraxin 1,NPTX1)基因CDS序列，利用生物信息学分析NPTX1蛋白的结构和功能，并研究其在多浪羊初情期启动过程中性腺轴不同组织中的表达规律。【方法】采集初情期前、初情期、初情期后健康雌性多浪羊的下丘脑、垂体、输卵管、卵巢、子宫组织，提取总RNA并反转录成cDNA,以初情期前下丘脑cDNA为模板，PCR扩增多浪羊NPTX1基因并克隆测序，对其进行生物信息学分析；采用实时荧光定量PCR分析NPTX1基因在多浪羊下丘脑、垂体、卵巢、子宫、输卵管5个组织中的表达水平。【结果】克隆得到NPTX1基因长1 576 bp,其中CDS区序列为1 299 bp,与GenBank上预测的绵羊mRNA序列(登录号：XM＿005683183.3)相似性达99.85%。系统进化树分析得出，多浪羊NPTX1基因与绵羊的遗传距离最近，与鸡的遗传距离最远。生物信息学分析发现，NPTX1蛋白为不稳定的亲水性酸性蛋白，具有1个信号肽，属于分泌蛋白；二级结构中α-螺旋和无规则卷曲占比分别为41.90%和40.73%,与三级结构预测结果一致。...