聚糖内切酶EGⅢ的克隆及其在酵母中的表达

[目的]构建可降解纤维类固体废弃物的工程菌.[方法]采用RT-PER方法克隆了绿色木霉(Trichoderma viride)AS313711的葡聚糖内切酶Ⅲ(EGⅢ)的cDNA,测序后构建到酵母表达载体pESP-2上,并通过电击法将其转到酵母感受态细胞中去,得到酵母表达转化子.通过DNS法测定该转化子在不同温度、不同pH值下酶活力的大小.[结果]EGⅢ的cDNA开放阅读框长度为1 257 bp,编码418个氨基酸,推测蛋白质分子量为44.1×103.在pH值为4.9、温度在60℃条件下,EGⅢ酶活力最高,相对酶活为100%.[结论]获得了高表达效率的EGⅢ-T-pESP-2酵母表达载体,其表达活性要比天然的酶高出3～5倍,只要调节好温度、pH值的关系,可提高纤维素葡聚糖内切酶的下游转化纤维素效率,在大规模生产中生产出大量的葡萄糖.