利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建水稻OsSLR1敲除突变体

GA是种子萌发的促进因子，能解除种子休眠和刺激萌发，GA的信号通路可以通过对DELLA蛋白的去抑制作用来完成的。通过对不同物种的DELLA蛋白功能的研究，发现不同物种的DELLA蛋白的功能具有高度保守性，本实验主要研究水稻中的DELLA蛋白SLR1，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建OsSLR1基因敲除突变株。首先，通过对OsSLR1的结构和功能域进行分析比对，最终选择3个靶点；然后，利用重组法构建CRISPR/Cas9敲除载体；最后，通过农杆菌介导法，将敲除载体转染成熟的日本晴水稻愈伤，待培育出幼苗，通过PCR和Western Blot进行鉴定。最终筛选得到1株Os SLR1敲除突变株系slr1-1，通过观察突变体萌发表型，发现slr1-1突变体第2天发芽率显著高于日本晴，而且slr1-1突变体的生长速度显著快于日本晴。通过不同浓度PAC对slr1-1突变体萌发表型的影响，发现水稻的DELLA蛋白SLR1敲出的突变体种子萌发不受PAC抑制，表明OsSLR1是通过调控GA信号途径影响水稻种子的萌发，详细的调控机制和互作蛋白等还有待深入的研究。通过对SLR1调控GA信号通路控制水...