| 苹果黑星病菌的分子检测 |
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| 引用本文： | 商 蓓,付 洁,罗泽青.苹果黑星病菌的分子检测[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2010,38(8):104-110. |
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| 作者姓名： | 商 蓓 付 洁 罗泽青 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学 植物保护学院，陕西省农业分子生物学重点实验室;西北农林科技大学 植物保护学院，陕西省农业分子生物学重点实验室;西北农林科技大学 植物保护学院，陕西省农业分子生物学重点实验室 |
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| 基金项目： | 教育部长江学者和创新团队发展计划项目（200558）；欧盟科技合作项目（ICA4-CT-2001-10001）；教育部“111”引智项目（B07049） |
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| 摘 要： | 【目的】建立苹果黑星病菌(Venturia inaequalis(Cooke)Wint)的分子检测方法,以提高检测精确度,缩短检测时间。【方法】根据苹果黑星病菌与其他苹果病原真菌核糖体基因转录间隔区(Internal transcribed spacer,ITS)序列间的差异,设计了1对特异性引物320A/320B,用于苹果黑星病菌的分子检测,对特异性引物扩增条件进行了优化,并验证和检验了引物的特异性和灵敏度。【结果】特异性引物的扩增条带约为320bp,优化的反应体系为:2μL MgCl2(25mmol/L),2.5μL 10×buffer,3μL dNTP(2.5mmol/L),1.2 μL引物320A/320B(10μmol/L),0.5μL聚合酶(5U/μL),1μL模版DNA(30ng/μL),加ddH2O至总体积25μL;反应程序为:94℃3min;94℃变性30s,60℃退火30s,72℃延伸30s,35个循环;72℃延伸10min。利用该对特异性引物对包括苹果黑星病菌在内的26个苹果病原菌菌株基因组DNA进行的PCR扩增表明,只有苹果黑星病菌能扩增到1条约320bp的特异性条带,其他菌株及阴性对照的扩增产物均未检测到特异性条带。对接种苹果黑星病菌的苹果组织的检测表明,该对引物能特异性地检测到苹果黑星病菌的存在,其对苹果黑星病菌基因组DNA检测的灵敏度为100fp/μL。【结论】利用设计的特异性引物320A/320B,参考正交试验优化的体系和程序,结合简单的SDS法提取苹果黑星病菌基因组DNA,在1个工作日内即可完成对该病原菌的分子检测。
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| 关 键 词： | 苹果黑星病菌 转录间隔区 特异性引物 正交优化 |
| 收稿时间： | 2010/1/18 0:00:00 |
Molecular detection of Venturia inaequalis |
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| SHANG Bei,FU Jie,LUO Ze-qing,HU Xiao-ping,YANG Jia-rong.Molecular detection of Venturia inaequalis[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2010,38(8):104-110. |
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| Authors: | SHANG Bei FU Jie LUO Ze-qing HU Xiao-ping YANG Jia-rong |
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| Institution: | (College of Plant Protection,Shaanxi Key Laboratory of Molecular Biology for Agriculture,Northwest A&F University,Yangling,Shaanxi 712100,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Venturia inaequalis ITS primer set optimization |
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