| 草鱼NK-lysin基因的克隆、原核表达与活性分析 |
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| 引用本文： | 王改玲,王明成,李传凤,潘磊,刘盼婷. 草鱼NK-lysin基因的克隆、原核表达与活性分析[J]. 水产学报, 2017, 41(10): 1500-1511. DOI: 10.11964/jfc.20160910553 |
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| 作者姓名： | 王改玲 王明成 李传凤 潘磊 刘盼婷 |
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| 作者单位： | 黄淮学院生物与食品工程学院,河南驻马店,463000 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（31402334）；河南省基础与前沿技术研究计划（142300410111） |
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| 摘 要： | 为研究草鱼抗菌肽NK-lysin基因的组成结构、在组织中的表达差异及其抑菌活性,实验根据已知鱼类NK-lysin基因保守区序列设计上下游引物,采用RT-PCR和RACEPCR技术克隆草鱼NK-lysin基因(Cinkl),RT-PCR进行各组织间的表达分析,并构建Cinkl成熟肽的原核表达载体,采用琼脂糖孔穴扩散法检测重组蛋白的抑菌活性。结果显示,Cinkl c DNA全长768 bp,编码121个氨基酸;基因组DNA全长3 361 bp,包含4个外显子和3个内含子。经多序列比对分析和结构域预测表明,Ci Nkl氨基酸序列具有SAPLIP家族的特征:含有6个保守的半胱氨酸和saposin B蛋白结构域,与斑马鱼Nklc、Nkld的相似性分别为57.98%和63.03%。构建NK-lysin氨基酸序列系统进化树,发现Ci Nkl与斑马鱼Nklc、Nkld聚为一支。RT-PCR检测结果显示,Cinkl m RNA在所有检测的草鱼组织中均有表达,在脾脏中表达量最高,心脏、鳃、中肾和头肾的表达量次之,皮肤、脑、肝脏和肠有微量表达。p ET-28b-MBP与Ci Nkl成熟肽序列构建的原核表达质粒在宿主菌Rosetta(DE3)表达出约57 ku的可溶性融合蛋白,利用Ni-NTA His·Bind树脂进行纯化,Ci Nkl重组蛋白对G–细菌如大肠杆菌M15株、嗜水气单胞菌,以及G+细菌如金黄色葡萄球菌均具有抑菌活性。基于草鱼NK-lysin的组织表达特征和重组蛋白的抑菌活性,推测NK-lysin在草鱼的先天性免疫防御中发挥调节作用。
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| 关 键 词： | 草鱼 NK-lysin 基因克隆 组织表达 抑菌活性 |
| 收稿时间： | 2016-09-23 |
| 修稿时间： | 2016-11-30 |
The cDNA cloning, expression and antibacterial activity of NK-lysin from grass carp (Ctenopharyngodon idella) |
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| WANG Gailing,WANG Mingcheng,LI Chuanfeng,PAN Lei and LIU Panting. The cDNA cloning, expression and antibacterial activity of NK-lysin from grass carp (Ctenopharyngodon idella)[J]. Journal of Fisheries of China, 2017, 41(10): 1500-1511. DOI: 10.11964/jfc.20160910553 |
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| Authors: | WANG Gailing WANG Mingcheng LI Chuanfeng PAN Lei LIU Panting |
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| Affiliation: | College of Biological and Food Engineering, Huanghuai University, Zhumadian 463000, China,College of Biological and Food Engineering, Huanghuai University, Zhumadian 463000, China,College of Biological and Food Engineering, Huanghuai University, Zhumadian 463000, China,College of Biological and Food Engineering, Huanghuai University, Zhumadian 463000, China and College of Biological and Food Engineering, Huanghuai University, Zhumadian 463000, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Ctenopharyngodon idella|NK-lysin|gene cloning|organization expression|antibacterial activity |
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