伪狂犬病病毒PCR检测方法的建立及初步应用

本研究根据伪狂犬病病毒(PRV)gp50的基因序列设计并合成引物,以我国闽A株细胞培养毒为模板,筛选最佳反应条件,建立了PRV的PCR检测方法。应用该方法对双城、Shope、Bartha等毒株的细胞培养物进行基因扩增都获得了分子量为321bp的特异性目的DNA片段,其检出敏感度为2×10~(-5)个TCID_(50)。用该方法检测人工感染仔猪的扁桃体、三叉神经节、鼻拭子、肺、脑,家兔的白细胞,小鼠的脑组织,其结果都呈现特异性阳性反应,检测狂犬病病毒,腺病毒、细小病毒皆为阴性结果。但是,应用该引物扩增马立克氏病病毒(MDV)基因,可发现一条大小约为27bp的DNA片段,表明PRV与MDV可能具有源性。本研究还建立了两种模板制备方法,即:通过煮沸裂解由细胞培养物制备DNA模板的简法,通过EDTA-胰蛋白酶消化→煮沸裂解→酚:仿:醇抽提由病料制备DNA模板的新法,为在临床上应用PRV PCR方法论断该病提供了可能。