犬细小病毒悬浮培养工艺研究

研究旨在证明犬细小病毒(CPV)悬浮培养的可能性，提高CPV P6株抗原的病毒含量，降低转瓶生产不同批次间疫苗质量差异，生产质量稳定的疫苗产品。试验利用大孔的纤维编织物BioNOCⅡ型微载体所提供的巨大表面积，实现Vero细胞高密度培养，建立了Tide-cell生物反应器大规模培养CPV P6株抗原制备工艺。结果显示：生物反应器Tide-cell载体罐内接入1.0×10¹⁰个F81种子细胞，在优化的参数条件下培养，用RPMI 1640培养液经过96 h培养，细胞总数为1.0×10¹¹个；在葡萄糖消耗量约为5 g/(L·h)时，按照病毒感染复数(MOI)=0.02将生产种毒CPV P6株接入Tide-cell微载体细胞培养瓶内，补加含8%血清的RPMI 1640病毒维持液至50 L，调整pH值为7.2～7.3，培养48 h收获，病毒含量至少为10^7.43 TCID50/mL。