鼠伤寒沙门氏菌细菌铁蛋白(Bfr)的生物信息学分析及原核表达载体构建

为了获得高纯度的鼠伤寒沙门氏菌细菌铁蛋白(Bfr),试验利用生物信息学软件对Bfr的结构、翻译后修饰和抗原表位等进行预测分析；通过PCR扩增鼠伤寒沙门氏菌Bfr基因，将其与pET-32a(+)载体连接并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中，通过SDS-PAGE分析和Western-blot检测表达及纯化后的目的蛋白。结果表明：Bfr由476个氨基酸组成，分子式为C₁₄₄₀H₂₄₀₆N₄₇₆O₆₀₆S₈₅,相对分子质量为38 808.87,理论等电点为5.25;无信号肽和跨膜区，二级结构包含α-螺旋(81.01%)、无规则卷曲(13.19%)、β-折叠(3.16%)和延伸链(1.90%);含有9个线性B淋巴细胞抗原表位和5个T淋巴细胞抗原表位，以及10个磷酸化位点和10个互作蛋白，Bfr和Bfrd蛋白表面匹配良好、结合稳定。试验成功克隆出Bfr基因，其大小约为476 bp,获得大小约为35 ku的高纯度重组蛋白Bfr。说明Bfr蛋白具有良好的反应原性，有可能成为鼠伤寒沙门...