猪流行性腹泻病毒nsp1、nsp5和N蛋白的重组腺病毒载体的构建及免疫原性比较

为研究猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)nsp1、nsp5和N蛋白的免疫原性，试验以复制缺陷型人腺病毒5型(AdMax系统)为载体，利用PEDV-GDgh毒株(登录号为MG983755),通过PCR方法扩增出GDgh毒株nsp1、nsp5、N基因，并将其连接到腺病毒穿梭载体上，构建重组穿梭质粒。将3个重组穿梭质粒和腺病毒骨架载体共转染至HEK-293A细胞中获得第1代重组腺病毒，分别命名为rAd-nsp1、rAd-nsp5、rAd-N。用第1代3株重组腺病毒接种HEK-293A细胞，连续传代，通过RT-PCR和Western-blot方法鉴定第3代重组腺病毒，并采用Reed-Muench法计算病毒半数组织培养感染剂量(TCID₅₀)。以3株重组腺病毒的第3代病毒液免疫小鼠，收集血清并检测特异性IgG抗体水平。结果表明：试验成功构建出带有nsp1、nsp5、N基因的重组穿梭质粒；分别用重组腺病毒rAd-nsp1、rAd-nsp5、rAd-N感染正常HEK-293A细胞，可产生典型的细胞病变并观察到荧光信号；...