田旋花EPSPS基因表达载体的构建及拟南芥转化

根据田旋花(Convolvulus arvensis L.)EPSPS基因(Gen Bank登录号:EU698030)c DNA序列,设计含有酶切位点的特异性引物,以田旋花c DNA为模板,合成EPSPS基因并连接到含有35S启动子和GUS基因的p BI121载体上,成功构建植物超表达载体p BI-EPSPS。采用氯化钙冻融法将其转入根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)中,然后用根癌农杆菌介导法转化拟南芥(Arabidopsis thaliana),共获得15株卡那霉素抗性拟南芥苗。对其中的5株进行PCR和RT-PCR检测,结果表明EPSPS基因已整合到拟南芥的基因组中并可以表达。