拟南芥抗寒基因ICE1的克隆及功能分析 |
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引用本文: | 刘 双,陈沼汀,董昭旭,等.拟南芥抗寒基因ICE1的克隆及功能分析[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2017,45(5):175-182. |
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作者姓名: | 刘 双 陈沼汀 董昭旭 等 |
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作者单位: | 吉林农业大学 植物生物技术中心 |
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基金项目: | 吉林省省级粮食生产发展专项资金项目(2015001);吉林农业大学启动基金项目(201242) |
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摘 要: | 【目的】从野生型拟南芥中克隆抗寒基因ICE1,通过农杆菌介导法将ICE1基因转到烟草中,对其功能进行研究。【方法】以三叶一心期拟南芥幼苗为材料,提取其总RNA,通过RT-PCR扩增得到ICE1基因的完整开放阅读框序列;构建以抗除草剂Bar基因为筛选标记的植物表达载体pCAMBIA3301-ICE1,通过农杆菌介导法转入到烟草中,对阳性植株进行PCR检测和生理生化指标测定,并对ICE1基因在转基因烟草植株中的表达特征进行分析。【结果】成功克隆了拟南芥抗寒基因ICE1,其完整开放阅读框长1 485bp。系统进化树表明,拟南芥ICE1基因与其他物种的ICE1基因差别较大。用农杆菌介导法得到4株阳性烟草植株,Southern blotting检测证明,ICE1基因已经以单拷贝的形式整合到烟草基因组中。实时荧光定量PCR检测表明,ICE1基因在转基因烟草植株的根、茎和叶片中均有表达,且在叶片中的相对表达量最高。4℃低温环境下,与未转化植株相比,转ICE1基因烟草植株叶片的相对电导率降低了12.00%~17.65%,脯氨酸含量增加了13.28%~24.10%,丙二醛含量减少了7.09%~14.52%,过氧化物酶活性提高了9.39%~22.54%。【结论】克隆获得了拟南芥ICE1基因的完整开放阅读框序列,在烟草中转入ICE1基因可提高其耐寒性。
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关 键 词: | ICE1基因 植物表达载体 耐寒性 |
收稿时间: | 2016/3/4 0:00:00 |
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