猪肺炎支原体SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

为建立一种快速高效的猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp）检测方法，根据NCBI公布的Mhp保守序列设计4对特异性引物，依据4对引物的荧光定量PCR检测结果及拟合曲线进行相关性分析，筛选出最佳引物（SX4），建立了Mhp SYBR Green Ⅰ实时荧光定量检测方法。该方法可特异性检测Mhp，对猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、副猪嗜血杆菌4型及链球菌2型等病原均无特异性扩增；最佳引物SX4检测的灵敏度可达4.9×101 copies/μL，组内和组间变异系数均小于2%。该方法可稳定检测出工艺生产抗原和市售疫苗中的Mhp菌量。试验表明，本研究成功建立了Mhp SYBR Green Ⅰ实时荧光定量检测方法，其特异性强、灵敏度高、重复性好，可用于Mhp疫苗抗原生产和临床疫苗中的Mhp菌量检测。