柑橘褪绿矮缩病毒dot-ELISA检测方法的建立及应用

【目的】柑橘褪绿矮缩病毒(Citrus chlorotic dwarf-associated virus,CCDaV)是一种新的柑橘病毒，为给我国柑橘脱毒苗木质量控制和田间监测提供技术支撑，建立了一种灵敏度高、特异性强的快速检测方法。【方法】通过序列分析和相似性比对，明确抗原靶标；构建CCDaV-CP的原核表达载体，诱导目的蛋白表达后作为抗原用于注射兔子，制备抗血清。运用Western blot检测效价。通过优化抗体浓度，建立CCDaV的dot-ELISA检测方法，明确其灵敏度，并用于田间疑似样品检测。【结果】以外壳蛋白(CP)的保守区域为靶标，成功构建了表达载体pET28a-CCDaV-CP，其在18℃，IPTG浓度0.5 mmol·L^-1时，诱导12 h，目的蛋白的表达量高。制备的特异性抗血清效价为1:3000。由此建立的dotELISA检测方法在提取液被稀释640倍时，仍能检测出CCDaV。应用该方法对42份田间疑似样品的检测结果与PCR法的符合率为94.73%。【结论】首次获得了CCDaV的抗血清，并以此建立了快捷、灵敏、准确的dot-ELISA检测方法，...