| 兔出血症病毒次要衣壳蛋白VP12在大肠杆菌体内高效表达及特性研究 |
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| 作者姓名： | 杨慧 刘吉山 李书光 王艳 于新友 于雪 沈志强 肖跃强 |
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| 作者单位： | 山东绿都生物科技有限公司,山东滨州,256600;山东省滨州畜牧兽医研究院,山东滨州,256600;山东绿都生物科技有限公司,山东滨州256600;山东省滨州畜牧兽医研究院,山东滨州256600 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;滨州市科技发展计划;中国农科院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金;山东省现代农业产业技术体系项目 |
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| 摘 要： | 试验旨在通过原核高效表达RHDV VP12蛋白,检测同源组织疫苗免疫后该蛋白抗体的产生情况。RT-PCR扩增获得抗原遗传变异株SQ-1株兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)次要衣壳蛋白VP12基因,定向克隆插入pET32a多克隆位点,构建Trx-His tag融合原核表达载体,PCR与序列测定正确后转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,Western blot鉴定分析表达产物活性。测序结果显示,所扩增VP12基因ORF(开放阅读框)为354 bp,编码117个氨基酸,IPTG诱导后目的基因获得表达,融合载体Trx-His tag的重组VP12蛋白分子量为31 ku,与预期一致,且表达蛋白存在可溶性与包涵体两种形式;Western blot结果显示,可溶性表达蛋白与兔瘟肝组织灭活疫苗免疫后攻毒制备的RHDV阳性抗体能发生良好的抗原抗体杂交反应,说明该蛋白具有良好的反应原性。研究结果为开展RHDV VP12蛋白生物学与免疫学特性研究、开发诊断试剂奠定了基础。
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| 关 键 词： | 兔出血症病毒 次要衣壳蛋白 原核表达 活性研究 抗体 |
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