猪CD1d蛋白多克隆抗体的制备及应用 |
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作者姓名: | 刘传霞 陈欣 王晓 李雪雯 李婷婷 翁长江 郑君 |
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作者单位: | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/动物疫病预防控制国家重点实验室/国家非洲猪瘟专业实验室/基础免疫创新团队 |
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基金项目: | 十四五国家重点研发计划(2021YFD1800100);;国家自然科学基金(32172874); |
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摘 要: | 【目的】制备猪源CD1d的多克隆抗体,为探究猪CD1d蛋白在非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染过程中的功能奠定基础。【方法】利用PCR方法扩增了猪CD1d基因,并将其同源重组至pGEX-6p1载体中,构建了原核重组表达质粒pGEX-6p1-CD1d。将重组质粒转化E.coli BL21(DE3)并用IPTG进行诱导表达,表达的GST-CD1d重组蛋白经SDS-PAGE和Western blot(WB)方法鉴定,SDS-PAGE结果显示约50 ku处有一条明显的条带,该蛋白以包涵体形式表达。然后利用谷胱甘肽琼脂糖亲和层析方法进行蛋白纯化,将纯化的GST-CD1d蛋白与等体积的弗氏完全佐剂混合乳化后,将纯化的蛋白免疫新西兰大白兔,采用颈背部多点皮下注射,免疫剂量为200μg/只,首免后第3周和第5周分别进行二免和三免,均采用弗氏不完全佐剂乳化,方法和剂量与首免相同。三免后第7天,通过耳缘静脉采血分离血清。首免后第7周进行第四次免疫,一周后心脏采血。该抗体经Protein G亲和层析纯化后冻存于-80℃冰箱。通过WB和间接免疫荧光(IFA)鉴定瞬...
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关 键 词: | CD1d蛋白 原核表达 多克隆抗体 非洲猪瘟病毒 CD2v蛋白 |
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