茶儿茶素合成关键酶基因CsANS和CsLAR的功能鉴定

以‘英红9号’茶树[Camelliasinensis(L.)O.Kuntze]为材料，克隆了儿茶素合成途径的两个关键酶基因CsANS和CsLAR，并利用原核表达、亚细胞定位以及转基因表达分析对其功能进行鉴定。结果表明，CsANS和CsLAR开放阅读框（openreadingframe,ORF）分别长1068和1029bp，与TPIA数据库中来源于‘舒茶早’的对应基因同源性均高达99%。CsANS和CsLAR可溶性蛋白均能在原核表达系统诱导获得，并经GST标签成功纯化。本氏烟草叶片的瞬时表达结果显示，CsANS和CsLAR编码的蛋白定位于细胞质和细胞核。利用农杆菌介导的遗传转化方法在茶愈伤组织中超表达CsANS和CsLAR，结果显示其均能显著促进总儿茶素的合成，其中CsANS主要促进顺式儿茶素（EC和EGCG）含量的增加，而CsLAR主要促进反式儿茶素（C、GC、CG和GCG）的积累。推测在‘英红9号’茶树中CsANS的功能主要是促进顺式儿茶素的合成，而CsLAR更利于反式儿茶素的合成。