烟草IspH基因的克隆与原核表达

IspH基因作为MEP途径中的关键酶具有促进下游萜类化合物产量的积累和提高植物对外界的抵御能力的特定作用,本研究旨在通过对烟草中IspH基因进行克隆与原核表达分析,从野生型烟草中提取总RNA,通过RT-PCR克隆获得IspH基因的cDNA序列(NCBI登录号:KC480443),序列分析表明,IspH基因的开放阅读框(ORF)长为1 386 bp,编码461个氨基酸,其编码的蛋白具有LytB个高度保守结构域;通过构建pET28a-IspH原核表达载体,转化到Escherichia coli BL21 (DE3)中,经IPTG诱导、SDS-PAGE电泳和Western Blot检测IspH蛋白,与预期大小一致约为51 kD,浓度为0.410 mg/mL,且纯度达到90%以上。目的蛋白的成功表达为进一步研究IspH基因在植物发育和抗逆性中的功能研究提供理论参考和数据支持。