人参CAS基因CRISPR/Cas9载体的构建及初步转化

基因编辑技术以细胞的自我修复机制为基础,通过非同源末端修复和同源重组途径达到基因编辑的目的。本试验以p RGEB32载体为基本骨架,利用同源重组法构建人参环阿屯醇合酶(CAS)基因的CRISPR/Cas9载体,以期达到基因敲除的目的,从基因层面对皂苷合成进行调控;探究了头孢霉素对人参愈伤组织和EHA105农杆菌菌液生长的影响,并设置适宜的浓度梯度对共培养后的材料进行抑菌。本试验成功构建了CAS基因的编辑载体并导入农杆菌用于遗传转化;人参愈伤组织不宜长期培养在头孢霉素浓度大于300 mg/L的抗性培养基中;共培养后的材料在500 mg/L的头孢抗性培养基上培养3 d,300 mg/L的培养基上培养5 d,转至100 mg/L的培养基并毎5～10 d更换一次,材料能较好地生长以用于基因编辑的后续研究。