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| 微小隐孢子虫类钙调蛋白基因的克隆与原核表达 | |
| 引用本文： | 杨晓娇,周鹏,米荣升,黄燕,石凯,王晓娟,王向佩,刘宇轩,雷晓思,陈兆国.微小隐孢子虫类钙调蛋白基因的克隆与原核表达[J].动物医学进展,2015(1). |
| 作者姓名： | 杨晓娇 周鹏 米荣升 黄燕 石凯 王晓娟 王向佩 刘宇轩 雷晓思 陈兆国 |
| 作者单位： | 1. 中国农业科学院上海兽医研究所，农业部动物寄生虫学重点实验室，中国农业科学院动物源性食品安全研究中心，上海 200241 2. 中国农业科学院上海兽医研究所，农业部动物寄生虫学重点实验室，中国农业科学院动物源性食品安全研究中心，上海 200241; 四川农业大学动物医学院，四川雅安625014 3. 中国农业科学院上海兽医研究所，农业部动物寄生虫学重点实验室，中国农业科学院动物源性食品安全研究中心，上海 200241; 吉林农业大学动物科学技术学院，吉林长春130118 |
| 基金项目： | 国家科技重大专项项目(2012ZX10004220)；中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目(2013JB13)；家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金课题(SKLVEB2013KFKT017)；上海市科技兴农重点攻关项目 |
| 摘 要： | 为了对微小隐孢子虫(C.parvum)类钙调蛋白(CML)基因进行原核表达,分析重组表达蛋白的反应原性。以C.parvum卵囊cDNA为模板,用PCR方法扩增得到C.parvum CML基因。将CML基因连接到克隆载体pMD18-T,获得重组质粒pMD-CML,经限制性内切酶BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后,连接到经相同内切酶酶切的表达载体pGEX-6p-1上,构建重组表达质粒,转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中进行诱导表达。利用GST亲和树脂法纯化重组表达蛋白,对纯化的重组蛋白进行Western blot分析。结果表明,成功构建了重组原核表达质粒pGEX-CML,重组质粒转化菌经IPTG诱导后成功地表达出了分子质量约为51ku的重组蛋白rCML,纯化的蛋白rCML能与感染兔隐孢子虫(C.cuniculus)的兔血清发生特异性反应,具有很好的反应原性。 |
| 关 键 词： | 微小隐孢子虫 类钙调蛋白基因 克隆 原核表达 |
Cloning and Prokaryotic Expression of C . p arvum Calmodulin-like Protein Gene |
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| YANG Xiao-jiao,ZHOU Peng,MI Rong-sheng,HUANG Yan,SHI Kai,WANG Xiao-juan,WANG Xiang-pei,LIU Yu-xuan,LEI Xiao-si,CHEN Zhao-guo.Cloning and Prokaryotic Expression of C . p arvum Calmodulin-like Protein Gene[J].Progress In Veterinary Medicine,2015(1). | |
| Authors: | YANG Xiao-jiao ZHOU Peng MI Rong-sheng HUANG Yan SHI Kai WANG Xiao-juan WANG Xiang-pei LIU Yu-xuan LEI Xiao-si CHEN Zhao-guo |
| Abstract: | |
| Keywords: | Cryptosporidium parvum calmodulin-like protein gene cloning prokaryotic expression |
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