间接竞争酶联免疫吸附法应用于采后水果组织中葡萄孢菌的定量分析

灰霉病是导致水果采后巨大经济损失的主要病害,其致病菌为葡萄孢菌。葡萄孢菌通常以潜伏侵染的形式存在,一旦病原菌发展蔓延则引起健康果实的迅速腐烂变质。因此,开发快速、灵敏的葡萄孢菌检测和定量分析方法势在必行。本文介绍了一种用于测定苹果(Red Delicious)、鲜食葡萄(Pink Moscatel)和梨(William’s)组织中葡萄孢菌的间接竞争酶联免疫吸附法(ELISA)。该方法的原理是基于水果组织中葡萄孢菌抗原与交联固定在微量滴定板表面的葡萄孢菌纯化抗原对于单克隆抗体结合位点的竞争作用。为了验证该方法的有效性,进行了如选择性、线性分析、精密度、准确性、灵敏性等大量的参数测定。该方法对于葡萄孢菌抗原的检测限为0.97μg.mL-1,为了保证测定的稳定性,事先将纯化抗原固定长达4个月。应用该方法可以对尚未表现症状的任何水果中的葡萄孢菌进行检测定量分析。通过与一项DNA定量测试结果进行对比,表明ELISA法的测定结果与DNA分析结果具有很好的相关性。本研究结果表明,新开发的测试方法实现了对无发病症状的果实中葡萄孢菌的检测分析,具有成本低廉、操作简便、快捷等优点,可将其应用于世界各国对水果等植物的病害检疫领域。

Development of an indirect competitive enzymelinked immunosorbent assay applied to the Botrytis cinerea quantification in tissues of postharvest fruits