表达α-烯醇化酶重组腺病毒的构建及其在籽鹅卵泡颗粒细胞中的过表达 |
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引用本文: | 计红,王江璐,张伟宏,郭景茹,杨焕民,柳巨雄,李士泽,孔凡志.表达α-烯醇化酶重组腺病毒的构建及其在籽鹅卵泡颗粒细胞中的过表达[J].中国预防兽医学报,2013(1):31-35. |
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作者姓名: | 计红 王江璐 张伟宏 郭景茹 杨焕民 柳巨雄 李士泽 孔凡志 |
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作者单位: | 黑龙江八一农垦大学动物科技学院;吉林大学畜牧兽医学院 |
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基金项目: | 黑龙江省自然科学基金重点项目(ZD20116) |
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摘 要: | 为构建表达籽鹅α-烯醇化酶(ENO1)基因的重组腺病毒,本研究利用RT-PCR技术,从籽鹅卵巢组织中扩增ENO1基因,克隆至pShuttle-CMV穿梭载体中,并利用I-CeuI与I-SceI将ENO1基因的表达框切下,连接到腺病毒骨架的pAdxsi载体中。采用PacⅠ酶切,将其线性化,并转染至293(R)细胞进行病毒的包装,制备重组腺病毒。实验结果显示,制备的表达ENO1重组腺病毒的滴度达到1.1×1011pfu/mL。将重组腺病毒感染籽鹅卵泡颗粒细胞后,荧光定量RT-PCR与western blot检测显示细胞中ENO1基因和蛋白表达水平显著高于正常细胞(p<0.05),这些结果为研究ENO1生物学活性及功能奠定了基础。
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关 键 词: | α-烯醇化酶 重组腺病毒 颗粒细胞 |
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