一株滑液囊支原体的分离鉴定及其磷酸丙糖异构酶（Tpi）和丙酮酸激酶（PK）抗体制备

磷酸丙糖异构酶(Tpi)和丙酮酸激酶(PK)是滑液囊支原体(MS)进行糖酵解的关键酶，牛支原体和鸡毒支原体的Tpi(tpiA基因编码)和PK(pyk基因编码)位于细胞膜和细胞质上，参与对宿主细胞的粘附，而MS的tpiA和pyk分别编码Tpi和Pyk，目前尚未见相关研究。本研究首先对临床分离的MS分离株的生长特性进行研究，然后使用OverlapPCR对tpiA和pyk进行点突变扩增，分别将其克隆至pET-28a载体并在BL21(DE3)中表达，用获得的TpiA和Pyk蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。结果表明：分离的MS分离株(MS-SD2020)最高生长滴定为10⁹，在生长60 h时达到最高滴定；对tpiA和pyk的序列进行分析表明，其在不同MS中高度保守，并成功表达大小分别为35.28和63.36 kDa的TpiA和Pyk重组蛋白，免疫后制备的兔多克隆抗体效价分别为32 000和2 048 000，本研究为后续开展MS的TpiA和Pyk功能研究提供参考。