非洲猪瘟病毒pK145R蛋白的原核表达及抗血清的制备

为制备兔抗ASFV pK145R蛋白的多克隆抗体，本研究以中国首次分离的ASFV HLJ/18毒株K145R基因的真核表达质粒p CAGGS-Flag-K145R为模板扩增K145R基因，构建重组原核表达质粒p ET-21a-K145R，利用镍亲和层析预装柱纯化p K145R蛋白并免疫新西兰大白兔，制备兔抗ASFV pK145R蛋白多克隆抗体，并通过免疫印迹（WB）、间接免疫荧光（IFA）及免疫沉淀（IP）试验对该抗体进行验证。结果显示：本研究成功构建了原核表达质粒p ET-21a-K145R，将该质粒转化细菌BL21(DE3)获得能够可溶性表达p K145R蛋白的重组菌，分子量约为16.0 kDa；利用高度纯化的ASFV pK145R蛋白，制备了兔抗ASFV pK145R蛋白的多克隆抗体，该抗体能够特异性地识别HEK293T细胞中瞬时表达的Flag-K145R蛋白和ASFV感染猪肺泡巨噬细胞中表达的ASFV K145R蛋白。本实验为深入研究p K145R蛋白的功能及其在ASFV感染致病性中的作用奠定了基础。