| 弓形虫新的表面抗原SRS20A的鉴定及特征化 |
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| 引用本文： | 林晓幸,李威,曹杰,周勇志,王亚楠,周金林,张厚双.弓形虫新的表面抗原SRS20A的鉴定及特征化[J].中国动物传染病学报,2023(5):93-100. |
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| 作者姓名： | 林晓幸 李威 曹杰 周勇志 王亚楠 周金林 张厚双 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院上海兽医研究所农业农村部动物寄生虫学重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（31772463）；;国家重点研发计划专项（2017YFE0108600）； |
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| 摘 要： | 克隆弓形虫上海SHR株SRS20A基因，构建原核表达体系，通过诱导表达和蛋白纯化，免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体，对蛋白进行特征化鉴定。采用PCR技术扩增弓形虫SRS20A基因，克隆至原核表达载体pET-30a（+）中，转化大肠埃希菌（E. coli）,IPTG诱导目的蛋白表达，采用镍亲和层析法获得纯化蛋白并免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体，使用弓形虫阳性血清检测SRS20A蛋白的反应原性，应用纯化的rSRS20A蛋白通过ELISA方法对猪临床样品进行检测，利用Western blot技术检测多克隆抗体与弓形虫天然蛋白的反应性，通过间接免疫荧光观察SRS20A蛋白在虫体内的定位情况。成功从弓形虫基因组中扩增出SRS20A目的基因，构建了pET-30a-SRS20A重组质粒，利用小鼠感染弓形虫的阳性血清可以特异性识别重组蛋白rSRS20A,ELISA试验表明rSRS20A可以与猪临床血清特异性反应，证明SRS20A具有良好的反应原性。制备并获得了抗SRS20A重组蛋白的多克隆抗体，通过Western blot可检测出弓形虫天然蛋白SRS20A的特异性条带。通过间接免疫荧光方法鉴定S...
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| 关 键 词： | 弓形虫 SRS20A 鉴定 特征化 |
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