猪源盖塔病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

猪盖塔病毒感染是由盖塔病毒(GETV)引起母猪妊娠初期胎儿死亡、初生仔猪发病的一种繁殖障碍性疾病。猪是自然界中GETV的主要扩增宿主，可以产生足够高的病毒血症滴度来感染叮咬的蚊子并维持GETV的传播周期，所以定期对猪群进行GETV监测对于预防潜在的GETV暴发具有重要意义。本研究通过分析GETV E2蛋白基因特征，设计特异性引物和探针，条件优化后建立检测GETV感染的Taq Man实时荧光定量PCR方法。结果表明：以阳性质粒为标准品建立的标准曲线在1×10²～1×10⁷ copies/μL内呈现良好的线性关系，扩增效率为1.61；该检测方法的最低检出限低至3.16 TCID₅₀/mL，远远低于普通PCR的检测限3.16×10³ TCID₅₀/m L；组内、组间重复性试验的变异系数均小于2%，具有良好的重复性和稳定性。本研究建立的方法能够快速有效的检测和定量GETV，为猪群中GETV监测提供可靠的检测方法。