牦牛乳球蛋白基因5＇调控区的分离、克隆及序列分析

根据文献设计1对PCR引物，寡聚核苷酸序列上游引物为：5＇-gCg，AAT，TCA，TCC，CAC，gTg，CCT，gC-3’，下游引物：5＇-gAg，AAT，TCC，Tgg，ggA，ggg，ACE；TT-3’。经68℃退火及30轮循环的PCR程序后扩增出长度为1447bp的DNA片段，将该片段从琼脂糖凝胶中回收，克隆到pMD18-T Vector后进行序列测定。序列分析结果表明，牦牛乳球蛋白基因5’调控区与文献报道的奶牛该基因同源性为97．65％，突出的碱基差异为牦牛乳球蛋白基因5’调控区发生了1个位点连续3个碱基的缺失突变和另一位点1个碱基的插入突变。该研究也为开展以牦牛乳球蛋白基因5’调控区为启动子的乳腺生物反应器研究准备了条件。