| 应用双分子荧光互补技术研究靶标肽与互补肽之间的互作关系 |
| |
| 引用本文： | 梁洪宇,刘成倩,高骏,周佳明,司伏生,易建中.应用双分子荧光互补技术研究靶标肽与互补肽之间的互作关系[J].西南农业学报,2023(2):427-434. |
| |
| 作者姓名： | 梁洪宇 刘成倩 高骏 周佳明 司伏生 易建中 |
| |
| 作者单位： | 1. 上海市农业科学院畜牧兽医研究所;2. 上海市金山区动物疫病预防控制中心 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(32072838)； |
| |
| 摘 要： | 【目的】基于双分子荧光互补(Bimolecular fluorescence complementation, BiFC)技术研究依据猪流行性腹泻病毒(PEDV)S蛋白受体结合位点肽段的靶标肽与互补肽在活细胞内的相互作用关系以及定位情况，为进一步利用该多肽进行猪流行性腹泻病毒的检测积累前期基础和提供理论支撑。【方法】依据靶标蛋白的氨基酸组成、所带电荷种类、形成分子间氢键的能力、极性的强弱、疏水性能等理化特性设计出靶标肽；根据靶标蛋白的氨基酸组成，设计出在理论上与其相互作用的互补肽，并利用生物信息学工具对靶标肽与互补肽进行预测分析；将靶标肽与互补肽的核苷酸序列分别插入EcoRΙ/XhoΙ双酶切后的pBiFC-VC155与NotΙ/SalΙ双酶切后的pBiFC-VN173载体中，构建出BiFC真核表达载体，经酶切及测序验证正确后转染Vero细胞来研究靶标肽与互补肽的互作关系以及形成的BiFC复合物在细胞内的精确定位。【结果】生物信息学分析表明靶标肽和互补肽分别带有亲水性和疏水性结构域，亲水性结构域都带有正负电荷，能够产生静电引力；酶切鉴定和测序结果表明成功构建了pBiFC-VC155-靶标...
|
| 关 键 词： | 猪流行性腹泻病毒 靶标肽 互补肽 蛋白互作 双分子荧光互补 病原诊断 |
|
|
