| 牛冠状病毒TaqMan荧光定量检测方法的建立及国内部分地区流行病学调查 |
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| 作者姓名： | 黄金 李思远 谢玲玲 周迪 杨蓉 王松 周华 蔡旭航 李基棕 李彬 |
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| 作者单位： | 1.江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室,江苏南京 210014;南京农业大学动物医学院,江苏南京 210095;2.江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室,江苏南京 210014;西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌 712100;3.贵州省种畜禽种质测定中心,贵州贵阳 550018;4.贵州省草地技术试验推广站,贵州贵阳 550025;5.黔西市动物疫病预防控制中心,贵州黔西 551500;6.江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室,江苏南京 210014;南京农业大学动物医学院,江苏南京 210095;江苏大学生命科学学院食品与生物工程学院,江苏镇江 212013 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划(编号：2021YFD1801101);;江苏省自然科学基金(编号：BK20221432); |
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| 摘 要： | 牛冠状病毒(BCoV)在全球广泛存在,在临床上能引起牛腹泻以及呼吸道感染,给养殖业带来巨大经济损失.为快速批量检测临床样品、分析国内的BCoV隐性感染及流行情况,根据BCoV的N基因序列设计了引物和探针,建立了 TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法,对其特异性、敏感性、重复性进行评估,并将其与靶向BCoV的N基因的常规RT-PCR方法进行对比.利用本方法对采集自我国西藏、江苏、河北、贵州、安徽等5个省份的22个未发病牛场的35份口腔拭子样品和244份粪便样品进行检测以了解流行情况.结果表明,质粒标准品拷贝数的对数与CT值呈现良好稳定的负线性关系,标准曲线为y=-3.441 8x+39.584 0,r2=0.999 4,E=98.2％;最低检测拷贝数为6.0 × 10拷贝/μL,重复性变异系数均＜5％;对临床样品进行检测,检出率明显高于常规RT-PCR方法.对22个牛场的279份病料进行检测,结果显示BCoV的总体阳性率为73.12％,牛场阳性率为100.00％.本研究成功建立了靶向BCoV N基因、灵敏度高、特异性好的荧光定量RT-PCR检测方法,并初步掌握了我国5个省份BCoV的流行现状,为后续BCoV研究奠定了基础.
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| 关 键 词： | 牛冠状病毒 TaqMan荧光定量 样品检测 隐性感染 RT-PCR |
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