| 绵羊黏膜趋化因子CCL28基因的克隆、序列分析与原核表达 |
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| 引用本文： | 乔新安,李宏基,王月影,朱彦彩,韩立强,杨国宇,王艳玲.绵羊黏膜趋化因子CCL28基因的克隆、序列分析与原核表达[J].畜牧兽医学报,2008,39(6). |
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| 作者姓名： | 乔新安 李宏基 王月影 朱彦彩 韩立强 杨国宇 王艳玲 |
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| 作者单位： | 1. 河南农业大学动物生理生化实验室,郑州,450002
2. 河南科技学院细胞工程重点实验室,新乡,453003 |
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| 摘 要： | 利用同源序列克隆原理设计1对克隆引物,从绵羊结肠黏膜组织提取mRNA,通过RT-PCR获得CCL28基因,将PCR产物克隆、测序,并进行序列分析;再根据克隆的序列设计1对表达引物,用PCR法从重组克隆载体中扩增出含BamHⅠ/XhoⅠ酶切位点的CCL28片段,双酶切后亚克隆至pGEX-4T-1载体,构建重组原核表达载体pGEX-CCL28,转化宿主菌E.coliBL21（DE3）,经IPTG诱导进行表达,SDS-PAGE鉴定。克隆的绵羊CCL28基因包含完整的开放阅读框,克隆片段长444 bp,ORF为387 bp,编码129个氨基酸,与人、小鼠、猪、牛该基因的同源性分别为76.4%、61.4%、84.3%和92.9%,推测的氨基酸序列与人、小鼠、猪、牛的同源性分别为76%、63%、84%和93%,表达的融合蛋白分子量约为39 ku,并以包涵体形式存在。为下一步研究绵羊CCL28的生物学功能奠定基础。
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| 关 键 词： | 绵羊 黏膜相关上皮趋化因子 分子克隆 序列分析 原核表达 |
Molecular Cloning, Sequence Analysis and Prokaryotic Expression of Ovine Mucosal Chemokine CCL28 |
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| QIAO Xin-an,LI Hong-ji,WANG Yue-ying,ZHU Yan-cai,HAN Li-qiang,YANG Guo-yu,WANG Yan-ling.Molecular Cloning, Sequence Analysis and Prokaryotic Expression of Ovine Mucosal Chemokine CCL28[J].Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica,2008,39(6). |
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| Authors: | QIAO Xin-an LI Hong-ji WANG Yue-ying ZHU Yan-cai HAN Li-qiang YANG Guo-yu WANG Yan-ling |
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