基于E165R基因非洲猪瘟LAMP快速检测方法的建立 |
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作者姓名: | 林涛 陈珺煜 王成龙 李芹 张怀东 刘峰 |
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作者单位: | 福建师范大学生命科学学院,福建福州350117;福建师范大学生命科学学院,福建福州350117;工业微生物发酵技术国家地方联合工程研究中心,福建福州350117 |
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基金项目: | 福建省自然科学基金项目(2020J01181); |
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摘 要: | 【目的】建立特异性好、灵敏度高的非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)环介导等温扩增(Loop-Mediated Isothermal Amplification, LAMP)快速检测方法,为非洲猪瘟的实时实地快速检测提供参考。【方法】通过对非洲猪瘟病毒多种基因型66个毒株的E165R基因多序列比对,选取相对保守区域设计LAMP引物,并对反应条件及反应体系进行优化。在获得的最优反应条件及体系下考察方法的检测特异性和灵敏性。【结果】选取的LAMP检测靶标235 bp(29~264 bp)在不同基因型ASFV毒株中保守性较好,序列相似度达94.46%~100%;LAMP反应的最佳温度为64℃、时间为35 min、Mg2+浓度为8 mmol/L、内外引物比为8︰1、Bst DNA聚合酶量为16 U。建立的ASFV环介导等温扩增检测方法最低检测限为50 copies/μL,较常规PCR检测提高1个数量级,且35 min即可完成扩增反应。LAMP检测方法与猪圆环病毒2型(PCV2)、伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸道综合症病毒(PR...
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关 键 词: | 非洲猪瘟病毒 E165R基因 环介导等温扩增 快速检测 特异性 灵敏性 |
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