| 抗 ICOSL 核糖体展示单链抗体库的构建 |
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| 引用本文： | 严浩,王芳,毛伟平,王文倩,孟素芳,邵峦峦,刘小綪.抗 ICOSL 核糖体展示单链抗体库的构建[J].安徽农业科学,2013(33):12819-12822. |
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| 作者姓名： | 严浩 王芳 毛伟平 王文倩 孟素芳 邵峦峦 刘小綪 |
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| 作者单位： | 南京师范大学生命科学学院江苏省分子医学重点实验室; |
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| 摘 要： | 目的]构建出鼠源抗ICOSL核糖体展示抗体库。方法]通过RT—PCR从人B淋巴瘤细胞Daudi的总RNA中扩增出ICOSL胞外区基因，并将此基因插入到原核表达载体pET28a中进行表达。以表达纯化的ICOSL蛋白为抗原免疫Balb／c小鼠，取小鼠脾脏提取总RNA，通过RT—PCR扩增小鼠的重链可变区和Linker（VH—linker）序列，以及轻链可变区和Linker（VK—linker）序列。经重组PCR将两段基因连接起来，将VH／K与pMD19一T载体链接产物转化E．coliDH50L，PCR鉴定并测序。结果]VH和κ链得到正确的扩增，长度分别为421和689bp，V14／κ连接产物正确，连接产物长度为1079bp。结论]所采用的引物及反应条件能够扩增出目的基因，成功构建了鼠源抗ICOSL核糖体展示抗体库，为进行核糖体展示体外筛选抗IcosL特异性单链抗体奠定基础。
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| 关 键 词： | ICOSL（可诱导共刺激因子配体） 单链抗体 核糖体展示技术 原核表达 |
Construction of Anti-ICOSL Ribosome Display Library |
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| Institution: | YAN Hao et al (Jiangsu Province Key Laboratory of Molecular and Medical Bioteehnology, College of Life Sciences, Nanjing Normal University, Nanjing, Jiangsu 210046) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | ICOS Sing-chain antibody Ribosome display Prokaryotic expression |
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