| 舒伯特气单胞菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用 |
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| 引用本文： | 刘礼辉,胡 蕾,杨圆圆,等.舒伯特气单胞菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2019,47(8):17-24. |
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| 作者姓名： | 刘礼辉 胡 蕾 杨圆圆 等 |
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| 作者单位： | 中国水产科学研究院珠江水产研究所农业部渔用药物创制重点实验室广东省水产动物免疫技术重点实验室;上海海洋大学水产与生命学院;广东省水生动物疫病预防控制中心;华中农业大学水产学院 |
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| 基金项目： | 2017年度广东省渔港建设和渔业发展专项资金（鱼病防治）项目；中国水产科学研究院基本科研业务费专项（2017HY-ZC0405） |
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| 摘 要： | 【目的】建立一种快速、灵敏的舒伯特气单胞菌(Aeromanas schubertii)检测方法。【方法】以舒伯特气单胞菌rpoD(RNA polymerase sigma-70 factor)为靶标基因,设计特异性引物及TaqMan探针,建立舒伯特气单胞菌的TagMan实时荧光定量PCR检测方法,同时验证该方法的特异性、灵敏度、重复性,并用该方法对50份临床样品进行检测,验证其应用效果。【结果】含舒伯特气单胞菌rpoD基因的质粒拷贝数与循环阈值(Ct)的标准曲线相关系数为1.000,扩增效率为94.705%。实时荧光定量PCR检测方法只对舒伯特气单胞菌的靶基因检测结果呈阳性,对嗜水气单胞菌(Aeromanas hydrophila)、维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)、温和气单胞菌(Aeromonas sobria)、诺卡氏菌(Nocardia seriolae)等其他14种致病菌的检测结果均为阴性,具有高度特异性;对舒伯特气单胞菌重组质粒和纯培养细菌的检出灵敏度分别为4.76拷贝/μL和15 CFU/mL;批内和批间重复性试验变异系数分别为0.95%和1.05%。50份临床样品检测结果显示,该方法阳性样品检出率为22%,高于传统细菌分离方法(10%)的检出率。【结论】建立的舒伯特气单胞菌实时荧光定量PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,适用于舒伯特气单胞菌的快速诊断检测和流行病学调查。
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| 关 键 词： | 舒伯特气单胞菌 rpoD基因 实时荧光定量 PCR |
| 收稿时间： | 2018/7/19 0:00:00 |
Development and application of a real-time PCR assay for detection of Aeromanas schubertii |
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| LIU Lihui,HU Lei and YANG Yuanyuan,et al.Development and application of a real-time PCR assay for detection of Aeromanas schubertii[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2019,47(8):17-24. |
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| Authors: | LIU Lihui HU Lei and YANG Yuanyuan |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Aeromanas schubertii rpoD gene real time PCR |
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