| 摘 要： | 克隆猪圆环病毒1型(PCV1)的Rep基因和猪圆环病毒2型(PCV2)Cap基因,利用T2A片段进行连接,并插入到载体pSCA,构建pSCA-Cap-T2A-Rep重组质粒。转染PK-15细胞后通过Western blot技术检测目的蛋白的表达。大量提取构建的重组质粒后进行小鼠接种试验。56只小鼠随机分为8组,每组7只。第1,2,3组为质粒注射组,注射质粒质量分别为50,100,200μg/只;第4～6组分别为与1～3组注射相同剂量质粒+免疫佐剂对应组;第7组为注射生理盐水对照组;第8组为注射生理盐水+佐剂对照组。首次接种后14 d进行第2次接种,处理方法同第1次。在首次接种后0,14,21,28 d从试验小鼠眼静脉丛采血,ELISA方法检测血清中PCV2 Cap蛋白抗体。结果显示,pSCA-Cap-T2A-Rep重组质粒接种小鼠血清中Cap蛋白特异性抗体在接种后14～28 d均为阳性;质粒+免疫佐剂组比质粒注射组小鼠特异性抗体水平显著升高。结果表明,pSCA-Cap-T2A-Rep重组质粒在试验小鼠中产生有效的特异性抗体,为进一步优化免疫方法、在试验猪上的应用及猪圆环病毒核酸疫苗的研制提供了依据。
|
