| miR-16逆转录病毒载体的构建与表达检测 |
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| 引用本文： | 王皓,孙宏瑶,侯坤,朴善花,安铁洙,王春生. miR-16逆转录病毒载体的构建与表达检测[J]. 黑龙江动物繁殖, 2015, 23(3): 6-9,12 |
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| 作者姓名： | 王皓 孙宏瑶 侯坤 朴善花 安铁洙 王春生 |
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| 作者单位： | 东北林业大学生命科学学院,黑龙江哈尔滨,150040 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(31271441) |
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| 摘 要： | 为了探明miR16在体细胞重编程过程中的作用机制,构建小鼠miR-16逆转录病毒载体。根据NCBI上小鼠miR16的相关序列,从小鼠基因组中扩增miR-16核心序列并将其连接到p MD18-simple载体,对重组质粒进行双酶切回收目的片段。将目的片段与p MXs逆转录病毒载体连接,经过酶切、PCR和测序鉴定,最终构建逆转录病毒载体miR16-p MXs;采用脂质体法将miR16-p MXs转染plat-E细胞,以包装逆转录病毒颗粒;用逆转录病毒颗粒侵染小鼠胚胎成纤维细胞,在侵染后的第5天,提取被侵染细胞的总RNA,反转录后获得cDNA,并采用q PCR方法检测侵染前后细胞中miR-16的相对表达量。结果显示,被逆转录病毒侵染后,小鼠成纤维细胞中miR-16的相对表达量比侵染前约提高1 460倍。结论:成功构建具有表达活性的microRNA16逆转录病毒载体,为进一步开展miR-16在细胞重编程中的作用机制的相关研究提供了依据。
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| 关 键 词： | microRNA miR-16 载体构建 表达检测 |
Construction and detection of retrovirus vector with mouse miR-16 |
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| WANG Hao , SUN Hong-yao , HOU Kun , PIAO Shan-hua , AN Tie-zhu , WANG Chun-sheng. Construction and detection of retrovirus vector with mouse miR-16[J]. Heilongjiang journal of animal reproduction, 2015, 23(3): 6-9,12 |
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| Authors: | WANG Hao SUN Hong-yao HOU Kun PIAO Shan-hua AN Tie-zhu WANG Chun-sheng |
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| Affiliation: | WANG Hao;SUN Hong-yao;HOU Kun;AN Tie-zhu;PIAO Shan-hua;WANG Chun-sheng;College of Life Science,Northeast Forestry University; |
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