| 猪LFA-1和CTLA-4实时荧光定量PCR检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 遇奇,李焕荣,孙英健,隋丽华. 猪LFA-1和CTLA-4实时荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 勤云标准版测试, 2009, 29(21) |
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| 作者姓名： | 遇奇 李焕荣 孙英健 隋丽华 |
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| 作者单位： | （1北京农学院动物科学技术系，北京 102206；2军事医学科学院实验动物中心，北京 100071） |
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| 基金项目： | 猪皮肤源树突状细胞在猪圆环病毒感染中作用;猪圆环病毒感染对骨髓细胞分化的影响 |
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| 摘 要： | 摘要：【研究目的】建立猪LFA-1和CTLA-4实时荧光定量PCR检测方法。【方法】根据GenBank中核苷酸序列设计猪淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)的特异性引物，经RT-PCR扩增、目的片段与载体连接转化以及重组质粒的鉴定，并对重组质粒标准品和样品cDNA进行检测，构建LFA-1和CTLA-4荧光定量RT-PCR标准曲线。【结果】以1×109~1×102拷贝/μL不同稀释水平的标准品进行荧光定量PCR扩增后，统计学分析显示标准品浓度的对数与Ct值之间存在良好的线性关系（LFA-1：RSq =0.992；CTLA-4：RSq =0.994）；样品检测显示LFA-1与CTLA-4引物的扩增曲线图和熔解曲线图的特异性。【结论】所构建的质粒标准品具有线性关系好、重复性好、敏感性高等特点，以及其引物在样品检测中的可应用性，为分析猪免疫细胞在感染病毒前后LFA-1和CTLA-4表达的变化以及评估猪体免疫功能，提供必要的技术平台。
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| 关 键 词： | 猪 实时荧光定量PCR 检测方法 LFA-1 CTLA-4。 |
Development of Real-time Fluorescent Quantitative PCR for Detection of Porcine LFA-1 and CTLA-4 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | porcinezz Real-time Fluorescent Quantitative PCRzz the detection methodzz LFA-1zz CTLA-4.zz |
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