牛源性无乳链球菌分离鉴定及 cfb 基因的克隆和真核表达载体的构建

为研制奶牛乳房炎无乳链球菌的基因工程疫苗，采集隐性奶牛乳房炎奶样，利用THB （ Todd-Hewitt Broth ）固体选择培养基和色素试验，并结合无乳链球菌种属特异性基因cfb，采用PCR技术从隐性乳房炎奶样中分离和鉴定无乳链球菌。根据GenBank已报道的链球菌cfb基因序列，经ORF分析和B细胞表位预测，利用Primer 5．0软件设计cfb因子富含B细胞表位区域引物，添加酶切位点和真核表达元件，以分离株无乳链球菌的基因组为模板，PCR扩增cfb基因并连接T载体克隆测序，经测序确定无误后，连接pcDNATM 3．1 V5-His A（ pcDNA-cfb）真核载体，转化DH5α感受态细胞，提取重组质粒进行酶切和测序鉴定。结果显示，从89份隐性奶牛乳房炎奶样中分离得到8株无乳链球菌，成功构建了真核表达载体（ pcDNA-cfb）。 THB和色素试验初步筛选，可以作为快速分离无乳链球菌的一种方法，利用Bcepred和Lasergene-Protean软件对分离得到的无乳链球菌cfb基因序列分析，在所克隆的cfb基因序列内有多个优势抗原表位，因此，有望作为无乳链球菌基因工程疫苗研制的抗原靶标基因序列，为进一步研究其基因工程疫苗提供基础条件。

Construction of Eukaryotic Expression Vector of cfb Gene from Bovine Streptococcus agalactiaee