| 毛果杨半胱氨酸蛋白酶基因PtCP2和PtCP4原核表达及蛋白纯化 |
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| 引用本文： | 张强,李丽红,要笑云,蒋璐瑶,王莹,撖静宜,曹山,李慧,陆海.毛果杨半胱氨酸蛋白酶基因PtCP2和PtCP4原核表达及蛋白纯化[J].南方农业学报,2016(4):511-518. |
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| 作者姓名： | 张强 李丽红 要笑云 蒋璐瑶 王莹 撖静宜 曹山 李慧 陆海 |
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| 作者单位： | 北京林业大学生物科学与技术学院,北京,100083 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(J1103516 |
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| 摘 要： | 【目的】对毛果杨半胱氨酸蛋白酶基因Pt CP_2和Pt CP4进行原核表达及重组蛋白纯化,为进一步研究该基因的酶学特征和生理功能打下基础。【方法】从毛果杨中克隆两个半胱氨酸蛋白酶基因Pt CP_2和Pt CP4,构建其原核表达载体p ET-30a-Pt CP_2及p ET-30a-Pt CP4,并在转入大肠杆菌后在体外诱导表达重组蛋白,采用包涵体洗涤法对目的蛋白进行纯化。【结果】Pt CP_2基因CDS序列全长1107 bp,编码368个氨基酸;Pt CP4基因CDS序列全长1104 bp,编码367个氨基酸。Pt CP_2和Pt CP4基因编码的蛋白均属于RD19A-like类型木瓜蛋白酶。Pt CP_2和Pt CP4基因在毛果杨根、茎、叶中均有表达,其中Pt CP_2在叶中表达量最高,Pt CP4在根中表达量最高。通过包涵体洗涤法在体外得到了高表达量、单一的重组蛋白Pt CP_2和Pt CP4,切除信号肽后蛋白酶大小分别为38.151和38.069 k D。【结论】原核表达获得的纯化重组蛋白Pt CP_2和Pt CP4可用于进一步研究毛果杨半胱氨酸蛋白酶的酶学特征和生理功能。
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| 关 键 词： | 毛果杨 半胱氨酸蛋白酶 原核表达 蛋白纯化 定量PCR |
Prokaryotic expression and protein purification of cysteine protease genes PtCP2 and PtCP4 from Populus trichocarpa Torr.& Gray |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Populus trichocarpa Torr & Gray cysteine protease prokaryotic expression protein purification real time quantitative PCR |
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