| 土壤宏基因组中抗草甘膦新基因的克隆及其功能验证 |
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| 引用本文： | 马 建,王云鹏,韦正乙,等. 土壤宏基因组中抗草甘膦新基因的克隆及其功能验证[J]. 西北农林科技大学学报(自然科学版), 2015, 43(8): 86-92 |
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| 作者姓名： | 马 建 王云鹏 韦正乙 等 |
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| 作者单位： | 吉林农业大学 农学院,吉林农业大学 农学院；吉林省农业科学院 农业生物技术研究所,吉林省农业科学院 农业生物技术研究所 |
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| 基金项目： | 国家转基因新品种培育重大专项(2008ZX08003-001)；吉林省科技厅创新工程项目(20076021) |
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| 摘 要： | 【目的】从土壤宏基因组中克隆新的抗草甘膦新基因,并对其功能进行验证,为培育抗除草剂转基因新品种奠定基础。【方法】利用被草甘膦污染的土壤建立宏基因组文库,经筛选从中成功克隆了一个新的具有草甘膦抗性的5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSPS)基因(命名为soilA)。构建了Prrn启动子驱动soilA基因的原核表达载体pSYTH-soilA,将其导入大肠杆菌进行原核草甘膦抗性试验,构建了35S启动子驱动soilA基因的植物表达载体pC330E,利用农杆菌介导法转化烟草,并对经PCR和胶体金试纸条鉴定的转基因烟草植株进行草甘膦耐受能力检测。【结果】序列分析表明,所获得的soilA基因长1 347bp,编码448个氨基酸,经BLAST分析,结果表明其属于ClassⅡ型EPSPS基因家族。原核表达soilA可使受体菌具有耐受1 200mmol/L草甘膦。构建soilA植物表达载体pC330E,通过农杆菌介导法将其导入烟草,经PCR和胶体金试纸条检测共获得107株阳性烟草植株,经过喷洒试验获得了3株高耐受草甘膦植株,这3株转基因烟草最高可耐受200mmol/L草甘膦。【结论】新克隆的编码EPSPS的soilA基因能够提高受体材料的草甘膦耐受能力。
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| 关 键 词： | 草甘膦抗性；5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶；宏基因组；烟草 |
| 收稿时间： | 2014-01-24 |
Cloning and functional analysis of a novel glyphosate resistant gene soilA from soil metagenome |
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| MA Jian,WANG Yun-peng and WEI Zheng-yi,et al. Cloning and functional analysis of a novel glyphosate resistant gene soilA from soil metagenome[J]. Journal of Northwest A&F University（Natural Science Edition）, 2015, 43(8): 86-92 |
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| Authors: | MA Jian WANG Yun-peng WEI Zheng-yi et al |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | glyphosate 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase metagenome tobacco |
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