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土壤宏基因组中抗草甘膦新基因的克隆及其功能验证
引用本文:马 建,王云鹏,韦正乙,等.土壤宏基因组中抗草甘膦新基因的克隆及其功能验证[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2015,43(8):86-92.
作者姓名:马 建  王云鹏  韦正乙  
作者单位:吉林农业大学 农学院,吉林农业大学 农学院;吉林省农业科学院 农业生物技术研究所,吉林省农业科学院 农业生物技术研究所
基金项目:国家转基因新品种培育重大专项(2008ZX08003-001);吉林省科技厅创新工程项目(20076021)
摘    要:【目的】从土壤宏基因组中克隆新的抗草甘膦新基因,并对其功能进行验证,为培育抗除草剂转基因新品种奠定基础。【方法】利用被草甘膦污染的土壤建立宏基因组文库,经筛选从中成功克隆了一个新的具有草甘膦抗性的5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSPS)基因(命名为soilA)。构建了Prrn启动子驱动soilA基因的原核表达载体pSYTH-soilA,将其导入大肠杆菌进行原核草甘膦抗性试验,构建了35S启动子驱动soilA基因的植物表达载体pC330E,利用农杆菌介导法转化烟草,并对经PCR和胶体金试纸条鉴定的转基因烟草植株进行草甘膦耐受能力检测。【结果】序列分析表明,所获得的soilA基因长1 347bp,编码448个氨基酸,经BLAST分析,结果表明其属于ClassⅡ型EPSPS基因家族。原核表达soilA可使受体菌具有耐受1 200mmol/L草甘膦。构建soilA植物表达载体pC330E,通过农杆菌介导法将其导入烟草,经PCR和胶体金试纸条检测共获得107株阳性烟草植株,经过喷洒试验获得了3株高耐受草甘膦植株,这3株转基因烟草最高可耐受200mmol/L草甘膦。【结论】新克隆的编码EPSPS的soilA基因能够提高受体材料的草甘膦耐受能力。

关 键 词:草甘膦抗性  5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶  宏基因组  烟草
收稿时间:2014/1/24 0:00:00

Cloning and functional analysis of a novel glyphosate resistant gene soilA from soil metagenome
MA Jian,WANG Yun-peng and WEI Zheng-yi,et al.Cloning and functional analysis of a novel glyphosate resistant gene soilA from soil metagenome[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2015,43(8):86-92.
Authors:MA Jian  WANG Yun-peng and WEI Zheng-yi  
Abstract:
Keywords:glyphosate  5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase  metagenome  tobacco
本文献已被 CNKI 等数据库收录!
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