鸡TBX6过表达和干扰载体构建及干扰载体效率检测

研究旨在构建TBX6的过表达和干扰载体，为后续研究TXB6在精原干细胞（Spermatogonial stem cells,SSCs）形成过程中的功能奠定基础。通过qRT-PCR检测TBX6在胚胎干细胞（Embryonic stem cells,ESCs）和SSCs的表达水平，根据NCBI上提供的TBX6 CDS区的序列，设计引物扩增目的片段，将其连接到经线性化的慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro上，构建TBX6的过表达载体；同时，根据TBX6 CDS区设计三个干扰靶点，在退火后将其连接到经线性化的干扰载体pLVX-shRNA2-puro上，并且进一步将三个干扰载体转染鸡成纤维细胞系（DF-1），观察荧光表达情况并通过qRT-PCR检测其干扰效率。结果显示，TBX6在SSCs上的表达量显著高于ESCs(P<0.05)，测序和双酶切验证显示成功构建TBX6过表达及干扰载体；干扰载体转染DF-1细胞后均能稳定表达EGFP荧光蛋白，且shRNA2-TBX6的干扰效果最好。结果表明，TBX6过表达及干扰载体构建成功，且经定量检测后确定shRNA2-...