| 苦荞蔗糖合酶SuSy基因在大肠杆菌中的表达及其纯化 |
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| 引用本文： | 李慧婧,魏玉梅,吴慧昊. 苦荞蔗糖合酶SuSy基因在大肠杆菌中的表达及其纯化[J]. 甘肃农业大学学报, 2020, 0(3): 71-77 |
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| 作者姓名： | 李慧婧 魏玉梅 吴慧昊 |
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| 作者单位： | 1.西北民族大学实验教学部 |
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| 基金项目： | 中央高校基本科研业务费专项(31920160056)； |
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| 摘 要： | 【目的】探究苦荞蔗糖合酶结构与功能的关系,构建表达载体以实现SuSy基因在大肠杆菌中的表达,并经亲和层析纯化后得到重组SuSy蛋白,为进一步研究该酶的结构和功能奠定基础.【方法】以苦荞(Fagopyrum tataricum)cDNA文库中克隆得到的蔗糖合酶基因重组质粒为模板,PCR扩增得到SuSy编码序列,将其与原核生物表达载体pET28a相连接构建了重组表达载体pET28a-SuSy,经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切及测序鉴定正确后将其转入大肠杆菌(Escherichia coli)感受态细胞BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达SuSy重组蛋白,并对其诱导表达条件进行优化.【结果】在37℃、1.2 mmol/L IPTG诱导10 h时,SuSy蛋白表达量最高,分子量大小约为53.4 ku,超声破碎后经SDS-PAGE检测到该蛋白以包涵体形式存在.【结论】利用Co2+亲和柱层析纯化和His-tag鉴定得到了高纯度的重组SuSy蛋白,为该酶结构与功能的研究及多克隆抗体制备奠定了基础.
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| 关 键 词： | 苦荞 蔗糖合酶 原核表达载体 纯化 |
Expression of sucrose synthase gene from buckwheat (Fagopyrum tataricum) in Escherichia coli and its purification |
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