| 罗非鱼源无乳链球菌ScpB蛋白的表达及IgM抗体间接ELISA方法的建立 |
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| 引用本文： | 农源,杨洋,滕婷,陈林,孙彤彤,郑喜邦,李恭贺,杨磊,韦仁,吴文德.罗非鱼源无乳链球菌ScpB蛋白的表达及IgM抗体间接ELISA方法的建立[J].黑龙江畜牧兽医,2024(2):119-128. |
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| 作者姓名： | 农源 杨洋 滕婷 陈林 孙彤彤 郑喜邦 李恭贺 杨磊 韦仁 吴文德 |
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| 作者单位： | 1. 广西大学动物科学技术学院;2. 广西壮族自治区兽用生物制品工程研究中心;3. 广西畜禽繁育与疾病防控重点实验室;4. 广西高校动物疫病预防与控制重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家现代农业产业技术体系广西创新团队项目“‘十三五’罗非鱼链球菌病诊断与监测技术的研究”(2016LFY0301)； |
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| 摘 要： | 为了建立一种具有良好特异性、敏感性、重复性和准确性的，能够检测罗非鱼源无乳链球菌的ELISA方法，试验首先进行了罗非鱼源无乳链球菌ScpB基因的克隆及其蛋白的表达和纯化，然后以重组蛋白作为包被抗原、罗非鱼待测血清作为一抗、抗罗非鱼IgM单克隆抗体2C10作为二抗、羊抗鼠IgG-HRP作为三抗建立间接ELISA方法并对该方法进行条件(抗原包被质量浓度、一抗稀释度、抗原包被条件、封闭液、一抗作用时间、二抗作用时间)优化，最后确定该方法的临界值并进行特异性、敏感性、重复性和符合性试验。结果表明：纯化后的罗非鱼源无乳链球菌ScpB蛋白大小为104.6 ku,与预期大小一致，可被罗非鱼IgM抗体特异性识别；建立的IgM抗体间接ELISA方法的最佳抗原包被质量浓度为0.1μg/mL,最佳一抗稀释度为1∶5,最佳抗原包被条件为4℃、12 h,最佳封闭液为5%脱脂乳，最佳一抗作用时间为2 h,最佳二抗作用时间为0.5 h;临界值上限为0.456,临界值下限为0.377;批内变异系数为3.349%～5.272%,批间变异系数为2.793%～5.902%,均低于10.000%;仅可检测出罗非鱼无乳链球菌阳...
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| 关 键 词： | 无乳链球菌 ScpB 罗非鱼 IgM ELISA |
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