| 转基因玉米中膦丝菌素乙酰转移酶双抗体夹心ELISA检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 刘志浩,高丽丽,王新桐.转基因玉米中膦丝菌素乙酰转移酶双抗体夹心ELISA检测方法的建立[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2013,41(11):45-50. |
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| 作者姓名： | 刘志浩 高丽丽 王新桐 |
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| 作者单位： | 山东农业大学 动物科技与动物医学院;山东农业大学 动物科技与动物医学院;山东农业大学 动物科技与动物医学院 |
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| 基金项目： | 国家转基因重大专项（2009VX08012-003B） |
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| 摘 要： | 【目的】以单克隆抗体(monoclonal antibody,mAbs)为基础,建立检测膦丝菌素乙酰转移酶(the phosphinothricin acetyltransferase,PAT)的双抗体夹心ELISA方法,为转基因玉米PAT蛋白的检测提供参考。【方法】由P3301质粒扩增出膦丝菌素乙酰转移酶基因(blalaphos resistance gene)bar,并与表达载体pET28a构建重组质粒,诱导表达产生外源性PAT蛋白;以纯化后的PAT蛋白为免疫原,制备mAbs,建立双抗体夹心ELISA方法,并与PCR检测方法进行比较,确定该方法的准确性和可靠性。【结果】应用mAbs 4D5和3E8成功建立了检测PAT蛋白的双抗体夹心ELISA方法,其有效检测范围为3.125~50ng/mL。采用该夹心ELISA方法对36份已知转基因背景的玉米样品进行了检测,根据阴阳性判定值OD450>0.210,检测出含PAT蛋白的Bt176阳性样品4份,以bar基因为检测目标利用传统PCR方法也检测出相同的Bt176样品4份,2种检测方法的符合率为100%。【结论】利用建立的双抗体夹心ELISA免疫学检测方法,可以对转基因玉米中的PAT蛋白进行准确、特异、有效的检测。
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| 关 键 词： | PAT蛋白 单克隆抗体 双抗体夹心ELISA Bt176 |
| 收稿时间： | 2012/12/24 0:00:00 |
Development of monoclonal antibody based sandwich ELISA to detect PAT protein in genetically modified maize |
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| LIU Zhi-hao;GAO Li-li;WANG Xin-tong;SUN Jia-zhi;YANG Zheng-you;CHAI Tong-jie.Development of monoclonal antibody based sandwich ELISA to detect PAT protein in genetically modified maize[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2013,41(11):45-50. |
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| Authors: | LIU Zhi-hao;GAO Li-li;WANG Xin-tong;SUN Jia-zhi;YANG Zheng-you;CHAI Tong-jie |
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| Institution: | LIU Zhi-hao;GAO Li-li;WANG Xin-tong;SUN Jia-zhi;YANG Zheng-you;CHAI Tong-jie;College of Animal and Veterinary Medicine,Shandong Agricultural University;College of Life Sciences,Shandong Agricultural University; |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | PAT monoclonal antibody sandwich ELISA Bt176 |
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