产气荚膜梭菌B型C58-1株β1毒素基因的克隆表达 |
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作者姓名: | 林初文 张松林 刘磊 马永彪 韩文瑜 汪洋 沈志强 |
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作者单位: | 1. 吉林大学动物医学学院, 长春 130062;2. 山东省滨州畜牧兽医研究院, 滨州 256600;3. 山东绿都生物科技有限公司, 滨州 256600 |
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基金项目: | 山东省现代农业产业技术体系羊产业创新团队项目(SATS-201226-3) |
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摘 要: | 利用PCR技术,从B型产气荚膜梭菌中国标准株C58-1株扩增出β1毒素基因,连接pMD18-T 载体筛选阳性克隆,然后用限制性核酸内切酶BamHⅠ和SalⅠ对其进行酶切,回收927 bp的β1毒素基因片段,将其定向克隆到载体pET-32a中,获得重组质粒pETβ927。将pETβ927转化至受体菌BL21(DE3)中,其表达产物经His-Trap FF预装柱纯化、SDS-PAGE 检测目的蛋白大小和分布及Western blotting检测其反应原性。结果表明,完整的β1毒素基因大小为1 011 bp,与GenBank发表的B型和C型产气荚膜梭菌β1毒素蛋白序列同源性达99.4%以上;SDS-PAGE结果显示重组目的蛋白在大肠杆菌中成功表达,融合蛋白大小为 54 ku,在超声波裂解上清和包涵体中均有分布,但以包涵体为主。Western blotting检测结果显示表达的重组蛋白可与特异性血清抗体发生免疫反应,表明β1毒素蛋白具有较好的反应原性。
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关 键 词: | B型产气荚膜梭菌中国标准株C58-1株 β1毒素基因 克隆表达 |
收稿时间: | 2014-08-15 |
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