文心兰OnAP1-like基因表达载体构建和遗传转化体系初探

根据NCBI网站上文心兰OnAP1-like基因序列设计引物,用RT-PCR法从南茜文心兰花葶中扩增OnAP1-like基因,对扩增产物进行测序。结果表明,获得的南茜文心兰OnAP1-like基因为690bp,与报道序列完全一致。将OnAP1-like基因插入pRI101-ON载体中,经PCR、双酶切及测序鉴定,证实重组表达质粒中含有目的片段,表明成功构建了高效植物表达载体pRI101-OnAP1。对OnAP1-like基因的结构域和所表达蛋白质的亲水性进行了分析,并预测了该基因所表达蛋白的三维结构。结果显示,该基因包含MADS-box和K-box保守域,属于MADS-box基因家族,所表达蛋白为亲水性蛋白。确定了一种文心兰的遗传转化条件,得到筛选抗生素G418的最适质量浓度为40mg/L,为进一步研究文心兰中AP1基因的功能奠定基础。