| 实时荧光定量RT-PCR检测剑尾鱼IgM mRNA方法的建立 |
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| 引用本文： | 张铃铃,任艳,石存斌,吴淑勤. 实时荧光定量RT-PCR检测剑尾鱼IgM mRNA方法的建立[J]. 大连水产学院学报, 2010, 25(2): 172-177 |
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| 作者姓名： | 张铃铃 任艳 石存斌 吴淑勤 |
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| 作者单位： | 1. 大连水产学院,生命科学与技术学院,辽宁,大连,116023;中国水产科学研究院,珠江水产研究所,广东,广州,510380
2. 中国水产科学研究院,珠江水产研究所,广东,广州,510380 |
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| 基金项目： | 农业公益性行业科研专项 |
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| 摘 要： | 根据剑尾鱼Xiphophorus helleri IgM和β-actin基因序列,分别在保守区域设计并合成引物,从注射免疫后的剑尾鱼头肾中提取总RNA逆转录合成cDNA,对目的片段进行PCR扩增、电泳纯化、T-A克隆及测序鉴定。将所得标准品质粒以10倍梯度进行稀释,采用SYBR Green I染料进行荧光定量扩增,构建标准曲线并进行融解曲线分析。结果表明：构建的剑尾鱼IgM和β-actin基因的标准品Ct值检测范围分别为7~21和8~25,扩增效率分别为2.025、1.970;融解曲线分析结果显示具有特异的单个峰,其Tm值分别为82.43℃、86.09℃,表明扩增产物特异性非常好。本实验中建立的剑尾鱼IgM基因实时荧光定量PCR方法可用于对剑尾鱼IgM基因的转录水平进行测定。
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| 关 键 词： | 剑尾鱼 IgM基因 实时荧光定量PCR |
Establishment of a method for IgM mRNA detecting in green swordtail Xiphophorus helleri by real-time quantitative PCR |
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| ZHANG Ling-ling,,REN Yan,SHI Cun-bin,WU Shu-qin. Establishment of a method for IgM mRNA detecting in green swordtail Xiphophorus helleri by real-time quantitative PCR[J]. Journal of Dalian Fisheries University, 2010, 25(2): 172-177 |
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| Authors: | ZHANG Ling-ling REN Yan SHI Cun-bin WU Shu-qin |
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| Affiliation: | ZHANG Ling-ling1,2,REN Yan2,SHI Cun-bin2,WU Shu-qin2 (1.School of Life Science , Technology,Dalian Fisheries Univ.,Dalian 116023,China,2.Pearl River Fisheries Research Institute,Chinese Academy of Fishery Sciences,Guangzhou 510380,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Xiphophorus helleri IgM gene real-time quantitative PCR |
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