| 猪肺炎支原体中国分离株热休克蛋白Hsp70(Dnak)的全基因克隆及C末端基因的表达与免疫活性分析 |
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| 引用本文： | 李媛,张建华,王亮,乔祖建,辛九庆.猪肺炎支原体中国分离株热休克蛋白Hsp70(Dnak)的全基因克隆及C末端基因的表达与免疫活性分析[J].中国预防兽医学报,2008,30(3):169-173. |
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| 作者姓名： | 李媛 张建华 王亮 乔祖建 辛九庆 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室,黑龙江,哈尔滨,150001 |
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| 摘 要： | 猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae，MHP）是猪气喘病的病原。DnaK又称为热休克蛋白Hsp70，具有分子伴侣和免疫的作用。以MHP中国分离株Yin-1为模板，扩增了DnaK基因的全序列，将该序列克隆到pMD18-T载体上并测序。测序结果Yin-1株DnaK基因即Hsp70基因全长1803bp，编码600aa，第631～633位TGA在支原体编码色氨酸而不是作为终止密码子。将该序列与多种致病支原体DnaK基因进行分析比较，发现Yin-1株与232株、J株、7448株等MHP菌株的DNA同源性为99.3％～99．4％，氨基酸同源性为99．2％～99.3％，而与非同种支原体的DNA和氨基酸同源性仅为64．5％～74．4％和59.3％～77％。这表明DnaK基因在种内高度保守，种间差异较大。以pET28a为载体构建重组质粒，原核表达DnaKC末端大小为1kb左右的基因，对表达的蛋白进行纯化后，通过Westernblot检测它的免疫活性。原核表达得到大小为41ku的目的蛋白．经Westernblot证实．纯化蛋白可与MHP阳性猪血清反应，具有免疫活性。
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| 关 键 词： | 猪肺炎支原体 猪喘气病 伴侣蛋白DnaK 热休克蛋白70 猪肺炎支原体 中国 分离株 热休克蛋白 Dnak 全基因克隆 末端基因 原核表达 免疫活性分析 Mycoplasma strain Chinese protein expression partial 血清反应 阳性 纯化蛋白 检测 Western |
| 文章编号： | 1008-0589（2008）03-0169-05 |
| 收稿时间： | 2007-02-18 |
| 修稿时间： | 2007年2月18日 |
Cloning and partial expression of the chaperones protein DnaK a Chinese strain of Mycoplasma hyopneumoniae |
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| LI Yuan,ZHANG Jian-hua,WANG Liang,QIAO Zu-jian,XIN Jiu-qing.Cloning and partial expression of the chaperones protein DnaK a Chinese strain of Mycoplasma hyopneumoniae[J].Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine,2008,30(3):169-173. |
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| Authors: | LI Yuan ZHANG Jian-hua WANG Liang QIAO Zu-jian XIN Jiu-qing |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | mycoplasma hyopneumoniae mycoplasma pneumoniae of swine chaperones protein DnaK heat shock protein 70 |
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