| 奶山羊EGFR蛋白胞外区的原核表达及其多克隆抗体的制备 |
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| 引用本文： | 马 跃,王建珏,黄江涛,等. 奶山羊EGFR蛋白胞外区的原核表达及其多克隆抗体的制备[J]. 西北农林科技大学学报(自然科学版), 2017, 45(12): 1-7 |
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| 作者姓名： | 马 跃 王建珏 黄江涛 等 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学 动物科技学院,陕西省农业分子生物学重点实验室,西北农林科技大学 动物科技学院,陕西省农业分子生物学重点实验室,西北农林科技大学 动物科技学院,陕西省农业分子生物学重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（31672398）；陕西省科技统筹创新工程计划项目（2016KTZDNY02-05） |
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| 摘 要： | 【目的】原核表达奶山羊表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)蛋白胞外区25-644位共620个氨基酸序列(ECD序列),纯化蛋白并免疫家兔,制备针对山羊EGFR蛋白的特异性多克隆抗体,为山羊EGFR蛋白功能研究奠定基础。【方法】以pMD19-T-EGFR为模板,采用PCR方法扩增得到EGFR胞外区(ECD)基因序列。将ECD序列连接pET-32a(+)质粒构建pET-32a(+)-ECD原核表达载体,将该重组载体导入大肠杆菌BL21(DE3)中并诱导表达。通过Ni-Charged MagBeads纯化重组蛋白后免疫2月龄白色獭兔,采用间接ELISA(iELISA)法测定抗体效价,Western blot检测抗体特异性。【结果】PCR扩增得到1 860bp的EGFR胞外区基因序列,成功构建pET-32a(+)-ECD载体。加入终浓度为0.8mmol/L的IPTG,于37℃诱导表达6h成功得到重组蛋白,该蛋白分子质量约94ku,且为以包涵体形式存在的变性蛋白。iELISA检测抗体效价为1∶16 000;Western blot检测表明,制备的多克隆抗体能特异性识别原核表达的ECD蛋白及在山羊乳腺上皮细胞和HEK293细胞中的EGFR蛋白。【结论】成功制备山羊EGFR多克隆抗体,该抗体可以用于科研试验。
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| 关 键 词： | 表皮生长因子受体(EGFR)；多克隆抗体；原核表达 |
| 收稿时间： | 2017-01-16 |
Prokaryotic expression,purification and preparation of polyclonal antibody for extracellular domain of epidermal growth factor receptor (EGFR) of dairy goat |
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| MA Yue,WANG Jianjue and HUANG Jiangtao,et al. Prokaryotic expression,purification and preparation of polyclonal antibody for extracellular domain of epidermal growth factor receptor (EGFR) of dairy goat[J]. Journal of Northwest A&F University（Natural Science Edition）, 2017, 45(12): 1-7 |
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| Authors: | MA Yue WANG Jianjue HUANG Jiangtao et al |
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